Fe wnaethom rannu sawl ystyriaeth yr wythnos diwethaf ar gyfer defnyddio electrofforesis bilen asetad cellwlos, a byddwn yn gorffen y pwnc hwn yma heddiw er mwyn cyfeirio ato.
Detholiad o Crynhoad Clustog
Mae'r crynodiad byffer a ddefnyddir mewn electrofforesis bilen asetad cellwlos yn gyffredinol is na'r hyn a ddefnyddir mewn electrofforesis papur. Y pH a ddefnyddir yn gyffredin 8.6Bfel arfer dewisir byffer arbital o fewn yr ystod o 0.05 môl/L i 0.09 mol/L. Wrth ddewis y crynodiad, gwneir penderfyniad rhagarweiniol. Er enghraifft, os yw hyd y stribed bilen rhwng yr electrodau yn y siambr electrofforesis yn 8-10cm, mae angen foltedd o 25V fesul centimedr o hyd y bilen, a dylai'r dwysedd presennol fod yn 0.4-0.5 mA fesul centimedr o led y bilen. Os na chaiff y gwerthoedd hyn eu cyflawni neu eu rhagori yn ystod electrofforesis, dylid cynyddu neu wanhau'r crynodiad byffer.
Bydd crynodiad byffer rhy isel yn arwain at symudiad cyflym y bandiau a chynnydd yn lled y bandiau. Ar y llaw arall, bydd crynodiad clustogi rhy uchel yn arafu mudo'r bandiau, gan ei gwneud hi'n anodd gwahaniaethu rhwng rhai bandiau gwahanu.
Dylid nodi, mewn electrofforesis bilen cellwlos asetad, bod cyfran sylweddol o'r cerrynt yn cael ei gynnal trwy'r sampl, sy'n cynhyrchu cryn dipyn o wres. Weithiau, gellir ystyried bod y crynodiad byffer a ddewiswyd yn briodol. Fodd bynnag, o dan amodau tymheredd amgylcheddol uwch neu wrth ddefnyddio foltedd uwch, gall anweddiad dŵr oherwydd y gwres ddwysau, gan arwain at grynodiad byffer rhy uchel a hyd yn oed achosi i'r bilen sychu.
Cyfrol Sampl
Mewn electrofforesis cellwlos bilen asetad, mae nifer y cyfaint sampl yn cael ei bennu gan ffactorau amrywiol, gan gynnwys amodau electrofforesis, priodweddau'r sampl ei hun, dulliau staenio, a thechnegau canfod. Fel egwyddor gyffredinol, po fwyaf sensitif yw'r dull canfod, y lleiaf y gall cyfaint y sampl fod, sy'n fanteisiol i'w wahanu. Os yw cyfaint y sampl yn ormodol, efallai na fydd y patrymau gwahanu electrofforetig yn glir, a gall staenio hefyd gymryd llawer o amser. Fodd bynnag, wrth ddadansoddi'n feintiol y bandiau lliw wedi'u gwahanu gan ddefnyddio dulliau canfod lliwimetrig elution, ni ddylai cyfaint y sampl fod yn rhy fach, oherwydd gall arwain at werthoedd amsugno is ar gyfer rhai cydrannau, gan arwain at wallau uwch wrth gyfrifo eu cynnwys. Mewn achosion o'r fath, dylid cynyddu cyfaint y sampl yn briodol.
Yn nodweddiadol, mae cyfaint y sampl a ychwanegir ar bob centimedr o'r llinell gais sampl yn amrywio o 0.1 i 5 μL, sy'n cyfateb i swm sampl o 5 i 1000 μg. Er enghraifft, mewn dadansoddiad electrofforesis protein serwm arferol, nid yw cyfaint y sampl a ychwanegir ar bob centimedr o'r llinell gais yn gyffredinol yn fwy na 1 μL, sy'n cyfateb i 60 i 80 μg o brotein. Fodd bynnag, wrth ddadansoddi lipoproteinau neu glycoproteinau gan ddefnyddio'r un dull electrofforesis, mae angen cynyddu cyfaint y sampl yn gyfatebol.
I gloi, dylid dewis y cyfaint sampl mwyaf addas yn seiliedig ar amodau penodol trwy gyfres o arbrofion rhagarweiniol.
Detholiad o Ateb Staenio
Mae'r bandiau sydd wedi'u gwahanu mewn electrofforesis pilen asetad cellwlos fel arfer yn cael eu staenio cyn eu canfod. Mae angen gwahanol ddulliau staenio ar wahanol gydrannau sampl, ac efallai na fydd y dulliau staenio sy'n addas ar gyfer electrofforesis bilen cellwlos asetad yn gwbl berthnasol i bapur hidlo.
Mae tair prif egwyddor i ddewis datrysiad staenio ar eu cyferbilen cellwlos asetad. Yn gyntaf,Dylid ffafrio llifynnau sy'n hydoddi mewn dŵr yn hytrach na llifynnau sy'n toddi mewn alcohol er mwyn osgoi crebachu ac anffurfiad pilen a achosir gan doddiant staenio'r olaf. Ar ôl staenio, mae'n bwysig rinsio'r bilen â dŵr a lleihau hyd y staenio. Fel arall, efallai y bydd y bilen yn cyrlio neu'n crebachu, a fyddai'n effeithio ar ganfod dilynol.
Yn ail, mae'n well dewis lliwiau â staenio cryf ar gyfer y sampl. Mewn electrofforesis pilen asetad cellwlos o broteinau serwm, defnyddir amino du 10B yn gyffredin oherwydd ei affinedd staenio cryf ar gyfer gwahanol gydrannau protein serwm a'i sefydlogrwydd.
Yn drydydd, dylid dewis llifynnau o ansawdd dibynadwy. Gall rhai llifynnau, er bod ganddynt yr un enw, gynnwys amhureddau sy'n arwain at gefndir arbennig o dywyll ar ôl staenio. Gall hyn hyd yn oed bylu'r bandiau a oedd wedi'u gwahanu'n dda yn wreiddiol, gan eu gwneud yn anodd gwahaniaethu rhyngddynt.
Yn olaf, mae'r dewis o grynodiad hydoddiant staenio yn bwysig. Yn ddamcaniaethol, gallai ymddangos y byddai crynodiad uwch o hydoddiant staenio yn arwain at staenio cydrannau sampl yn fwy trylwyr a chanlyniadau staenio gwell. Fodd bynnag, nid yw hyn yn wir. Mae gan yr affinedd rhwymol rhwng y cydrannau sampl a'r llifyn derfyn penodol, nad yw'n cynyddu gyda'r cynnydd mewn crynodiad hydoddiant staenio. I'r gwrthwyneb, mae crynodiad toddiant staenio rhy uchel nid yn unig yn gwastraffu'r lliw ond hefyd yn ei gwneud hi'n anodd cael cefndir clir. Ar ben hynny, pan fydd y dwysedd lliw yn cyrraedd uchafswm gwerth penodol, nid yw cromlin amsugno'r llifyn yn dilyn perthynas llinol, yn enwedig mewn electrofforesis bilen cellwlos asetad mesur meintiol, mae crynodiad yr hydoddiant staenio yn gyffredinol yn is na'r hyn a ddefnyddir mewn electrofforesis papur.
Manylion i wybod am Beijing Liuyi Biotechnoleg's bilen cellwlos asetadtanc electrofforesis a'i gymhwysiad electrofforesis, ewch yma:
lArbrawf i wahanu protein serwm trwy bilen Cellwlos Asetad
lElectrofforesis bilen Asetad Cellwlos
lDylid Cadw Sawl Ystyriaeth Wrth Ddefnyddio Electrofforesis Pilen Asetad Cellwlos (1)
Os oes gennych unrhyw gynllun prynu ar gyfer ein cynnyrch, mae croeso i chi gysylltu â ni. Gallwch anfon neges atom trwy e-bost[e-bost wedi'i warchod]neu[e-bost wedi'i warchod], neu ffoniwch ni ar +86 15810650221 neu ychwanegwch Whatsapp +86 15810650221, neu Wechat: 15810650221.
Cyfeirnod:Electrophoresis (Ail argraffiad) gan Mr. Li
Amser postio: Mehefin-06-2023