Egwyddor Arbrawf
Nod electrofforesis hemoglobin yw canfod a chadarnhau hemoglobinau normal ac annormal amrywiol.
Oherwydd y gwahanol daliadau a phwyntiau isoelectric o wahanol fathau o haemoglobin, mewn datrysiad byffer pH penodol, pan fo pwynt isoelectric haemoglobin yn is na pH yr hydoddiant byffer, mae hemoglobin yn cario gwefr negyddol ac yn mudo tuag at yr anod yn ystod electrofforesis. I'r gwrthwyneb, mae haemoglobin â gwefr bositif yn symud tuag at y catod.
O dan foltedd penodol ac ar ôl amser electrofforesis penodol, mae haemoglobinau â gwahanol daliadau a phwysau moleciwlaidd yn arddangos gwahanol gyfeiriadau a chyflymder mudo. Mae hyn yn caniatáu ar gyfer gwahanu parthau gwahanol, a gellir cynnal dadansoddiad sganio lliwimetrig neu electrofforetig dilynol ar y parthau hyn i fesur haemoglobinau amrywiol. Y dull a ddefnyddir amlaf yw pH 8.6 electrofforesis bilen cellwlos asetad.
O fewn y cytoplasm, mae grwpiau glycol ethylene (CHOH-CHOH) sy'n bresennol mewn sylweddau glycogen neu polysacarid (fel mucopolysacaridau, mucoproteinau, glycoproteinau, glycolipidau, ac ati) yn cael eu ocsideiddio gan asid cyfnodol a'u trosi'n grwpiau aldehyd (CHO-CHO). Mae'r grwpiau aldehyde hyn yn cyfuno â'r adweithydd Schiff coch-porffor di-liw, gan ffurfio llifyn porffor-goch sy'n dyddodi lle mae polysacaridau yn bresennol yn y gell. Gelwir yr adwaith hwn yn staen cyfnodol asid-Schiff (PAS), a elwid gynt yn staenio glycogen.
Dull Arbrawf
Deunyddiau:Asetad cellwlosmembrane, cyfarpar electrofforesis(DYCP-38C a chyflenwad pŵer DYY-6C), Offeryn Llwytho Sampl Uwch (pibed), sbectroffotomedr, cuvettes lliwimetrig, byfferau.
Clustog:
(1) pH 8.6 TEB Clustogi: Pwyso 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g asid boric, ac ychwanegu dŵr distyll i 1000 ml.
(2) Clustogi Borate: Pwyswch 6.87 g borax a 5.56 g asid borig, ac ychwanegwch ddŵr distyll i 1000 ml.
Gweithdrefn:
Pgwneud iawn am Ateb Haemoglobin
Cymerwch 3 ml o waed sy'n cynnwys heparin neu sodiwm sitrad fel gwrthgeulydd. Centrifuge ar 2000 rpm am 10 munud a thaflu'r plasma. Golchwch y celloedd coch y gwaed deirgwaith gyda halwynog ffisiolegol (750 rpm, centrifugation 5 munud bob tro). Centrifuge ar 2200 rpm am 10 munud a thaflu'r supernatant. Ychwanegwch yr un faint o ddŵr distyll, yna ychwanegwch 0.5 gwaith cyfaint y carbon tetraclorid. Ysgwydwch yn egnïol am 5 munud, ac yna centrifuge ar 2200 rpm am 10 munud i gasglu'r hydoddiant Hb uchaf i'w ddefnyddio'n ddiweddarach.
Mwydo'r Bilen
Torrwch y bilen asetad cellwlos yn stribedi sy'n mesur 3 cm × 8 cm. Mwydwch nhw mewn byffer pH 8.6 TEB nes eu bod yn hollol ddirlawn, yna tynnwch nhw a'u sychu â phapur hidlo.
Sbotio
Defnyddiwch bibed i weld 10 μl o'r hydoddiant haemoglobin yn fertigol ar y bilen cellwlos asetad (yr ochr arw), tua 1.5 cm o'r ymyl.
Electrofforesis
Arllwyswch y toddiant byffer borate i'r siambr electrofforesis. Rhowch y bilen asetad cellwlos gyda'r ochr fraith ar ben catod y siambr. Rhedeg ar 200 V am 30 munud.
Elution
Torrwch y parthau HbA a HbA2 allan, rhowch nhw mewn tiwbiau profi ar wahân, ac ychwanegwch 15 ml a 3 ml o ddŵr distyll, yn y drefn honno. Ysgwydwch yr haemoglobin yn gyfan gwbl, yna cymysgwch.
Lliwfesuredd
Dim yr amsugnedd gan ddefnyddio dŵr distyll ar gyfer yr hydoddiant elution a mesur yr amsugnedd ar 415 nm.
Cyfrifiad
HbA2(%) = Amsugno tiwb HbA2 / (Amsugno tiwb HbA × 5 + Amsugno tiwb HbA2) × 100%
Cyfrifiad Canlyniadau Arbrofol
Ystod Cyfeirnod ar gyfer pH 8.6 TEB Electrofforesis Asetad Cellwlos Byffer: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%
Nodiadau
Ni ddylai amser electrofforesis fod yn rhy hir. Ni ddylai'r bilen asetad cellwlos sychu yn ystod electrofforesis. Stopiwch electrofforesis pan fydd HbA a HbA2 wedi'u gwahanu'n glir. Gall electrofforesis hirfaith achosi trylediad bandiau ac niwlio.
Ceisiwch osgoi defnyddio gormod o sampl. Gall gormod o hylif hemoglobin arwain at ddatgysylltiad bandiau neu staenio annigonol, gan arwain at lefelau HbA uchel iawn.
Atal halogiad y bilen cellwlos asetad â phroteinau.
Ni ddylai'r presennol fod yn rhy uchel; fel arall, efallai na fydd bandiau haemoglobin yn gwahanu.
Dylech bob amser gynnwys sbesimenau gan unigolion normal a haemoglobinau annormal hysbys angenrheidiol fel rheolyddion.
Mae Beijing Liuyi Biotechnology yn cynhyrchu'r tanc electrofforesis proffesiynol ar gyfer electrofforesis haemoglobin sef y modelDYCP-38Ctanc electrofforesis bilen asetad cellwlos, ac mae dau fodel o gyflenwad pŵer electrofforesis ar gael ar gyfer y tanc electrofforesis pilen asetad cellwlosDYY-2CaDYY-6Ccyflenwad pŵer.
Yn y cyfamser, mae Beijing Liuyi Biotechnology yn darparu bilen asetad cellwlos i gwsmeriaid, a gellir addasu maint y bilen asetad cellwlos. Croeso i ofyn i ni am samplau a mwy o wybodaeth.
Mae gan frand Beijing Liuyi hanes mwy na 50 mlynedd yn Tsieina a gall y cwmni ddarparu cynhyrchion sefydlog o ansawdd uchel ledled y byd. Trwy flynyddoedd o ddatblygiad, mae'n deilwng o'ch dewis!
Rydym nawr yn chwilio am bartneriaid, croesewir tanc electrofforesis OEM a dosbarthwyr.
Os oes gennych unrhyw gynllun prynu ar gyfer ein cynnyrch, mae croeso i chi gysylltu â ni. Gallwch anfon neges atom trwy e-bost[e-bost wedi'i warchod]neu[e-bost wedi'i warchod], neu ffoniwch ni ar +86 15810650221 neu ychwanegwch Whatsapp +86 15810650221, neu Wechat: 15810650221
Amser postio: Medi-20-2023