Mae Comet Assay (Electrofforesis Gel Cell Sengl, SCGE) yn dechneg sensitif a chyflym a ddefnyddir yn bennaf i ganfod difrod DNA ac atgyweirio mewn celloedd unigol. Daw’r enw “Comet Assay” o’r siâp comet nodweddiadol sy’n ymddangos yn y canlyniadau: mae cnewyllyn y gell yn ffurfio’r “pen,” tra bod y darnau DNA sydd wedi’u difrodi yn mudo, gan greu “cynffon” sy’n debyg i gomed.
Egwyddor
Mae egwyddor y Comet Assay yn seiliedig ar ymfudiad darnau DNA mewn maes trydan. Mae DNA cyfan yn aros o fewn cnewyllyn y gell, tra bod DNA wedi'i ddifrodi neu dameidiog yn mudo tuag at yr anod, gan ffurfio “cynffon” y gomed. Mae hyd a dwyster y gynffon mewn cyfrannedd union â maint y difrod DNA.
Gweithdrefn
- Paratoi Cell: Mae celloedd sydd i'w profi yn cael eu cymysgu ag agarose pwynt toddi isel a'u lledaenu ar sleidiau microsgop i ffurfio haen unffurf.
- Cell Lysis: Mae'r sleidiau'n cael eu trochi mewn hydoddiant lysis i dynnu'r gellbilen a'r bilen niwclear, gan ddatgelu'r DNA.
- Electrofforesis: Rhoddir y sleidiau mewn siambr electrofforesis o dan amodau alcalïaidd neu niwtral. Mae darnau DNA sydd wedi'u difrodi yn mudo tuag at yr electrod positif o dan ddylanwad y maes trydan.
- Staenu: Ar ôl electrofforesis, mae'r sleidiau'n cael eu staenio â llifyn fflwroleuol (ee, bromid ethidium) i ddelweddu'r DNA.
- Dadansoddiad Microsgopig: Gan ddefnyddio microsgop fflworoleuedd neu feddalwedd arbenigol, dadansoddir y siapiau comet, a mesurir paramedrau megis hyd a dwyster y gynffon.
Delwedd o biorendr
Dadansoddi Data
Mae canlyniadau Comet Assay yn cael eu gwerthuso yn seiliedig ar nifer o baramedrau allweddol:
- Hyd Cynffon: Yn cynrychioli'r pellter mae'r DNA yn mudo, gan nodi maint y difrod DNA.
- Cynnwys DNA Cynffon: Canran y DNA sy'n mudo i'r gynffon, a ddefnyddir yn aml fel mesur meintiol o ddifrod DNA.
- Moment Cynffon Olewydd (OTM): Yn cyfuno hyd y gynffon a chynnwys DNA y gynffon i ddarparu mesur mwy cynhwysfawr o ddifrod DNA.
Ceisiadau
- Astudiaethau Genowenwyndra: Mae'r Comet Assay yn cael ei ddefnyddio'n helaeth i asesu effeithiau cemegau, cyffuriau, ac ymbelydredd ar DNA celloedd, gan ei wneud yn arf allweddol ar gyfer profi genowenwyndra.
- Tocsicoleg Amgylcheddol: Mae'n helpu i ddadansoddi effaith llygryddion amgylcheddol ar DNA organebau, gan ddarparu mewnwelediad i ddiogelwch ecosystemau.
- Ymchwil Feddygol a Chlinigol: Defnyddir y Comet Assay wrth astudio mecanweithiau atgyweirio DNA, canser, a chlefydau eraill sy'n gysylltiedig â DNA. Mae hefyd yn gwerthuso effaith therapïau canser fel radiotherapi a chemotherapi ar DNA.
- Gwyddorau Bwyd ac Amaethyddiaeth: Defnyddir i asesu diogelwch plaladdwyr, ychwanegion bwyd, a sylweddau eraill, ac i astudio eu heffeithiau gwenwynig mewn modelau anifeiliaid.
Manteision
- Sensitifrwydd Uchel: Yn gallu canfod lefelau isel o ddifrod DNA.
- Gweithrediad Syml: Mae'r dechneg yn syml, gan ei gwneud yn addas ar gyfer sgrinio trwybwn uchel.
- Cais Eang: Gellir ei gymhwyso i wahanol fathau o gelloedd, gan gynnwys celloedd anifeiliaid a phlanhigion.
- Heriau Meintioli: Wrth ddarparu data ansoddol ar ddifrod DNA, mae dadansoddiad meintiol yn dibynnu'n fawr ar dechnegau dadansoddi meddalwedd a delwedd.
- Amodau Arbrofol: Gall canlyniadau gael eu dylanwadu gan ffactorau fel amser electrofforesis a pH, sy'n gofyn am reolaeth ofalus ar amodau arbrofol.
Cyfyngiadau
Mae'r Comet Assay yn arf amhrisiadwy mewn ymchwil biofeddygol, gwyddor amgylcheddol, a datblygu cyffuriau oherwydd ei hyblygrwydd a'i sensitifrwydd uchel wrth ganfod difrod DNA ac atgyweirio. Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology)yn cynnig siambr electrofforesis llorweddol ar gyfer assay comed. Croeso i chi gysylltu â ni i drafod yAssay Cometprotocol.
Mae Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) wedi arbenigo mewn gweithgynhyrchu offerynnau electrofforesis am fwy na 50 mlynedd gyda'n tîm technegol proffesiynol a'n canolfan ymchwil a datblygu ein hunain. Mae gennym linell gynhyrchu ddibynadwy a chyflawn o ddylunio i arolygu, a warws, yn ogystal â chymorth marchnata. Mae ein prif gynnyrch Electrofforesis Cell (tanc / siambr), Electrofforesis Cyflenwad Pŵer, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Delwedd a Dadansoddi System ac ati Rydym hefyd yn cyflenwi yr offerynnau labordy fel PCR offeryn, cymysgydd fortecs a centrifuge ar gyfer labordy.
Os oes gennych unrhyw gynllun prynu ar gyfer ein cynnyrch, mae croeso i chi gysylltu â ni. Gallwch anfon neges atom trwy e-bost[e-bost wedi'i warchod]neu[e-bost wedi'i warchod], neu ffoniwch ni ar +86 15810650221 neu ychwanegwch Whatsapp +86 15810650221, neu Wechat: 15810650221.
Sganiwch y cod QR i'w ychwanegu ar Whatsapp neu WeChat.
Amser post: Medi-20-2024